Techniques de Prélèvement et Identification Bactérienne Clé

Techniques de Prélèvement et Identification Bactérienne

Prélèvements Cliniques

Prélèvement Nasal (Écouvillon)

Ce prélèvement est essentiel pour identifier les porteurs potentiels de Staphylococcus aureus.

Procédure de prélèvement nasal

1. Prendre un écouvillon stérile.
2. Placer l'écouvillon dans le nez, en entrant dans le nasopharynx.
3. Frotter la cloison et le plancher des narines.
4. Tourner la tige doucement, laisser reposer 10 à 15 secondes, puis retirer.

Prélèvement Pharyngé

Préparation et technique

Le patient doit être installé confortablement, avec un bon éclairage. Lui demander de prononcer la lettre « A ».

• Utiliser un abaisse-langue pour abaisser la langue.
• Frotter l'écouvillon sur les deux amygdales et la paroi postérieure du pharynx avec des mouvements rotatifs.
• Attention : Ne pas toucher la langue ou la luette.

Prélèvement d'Expectoration (Crachat)

Instructions pour le patient

1. Le patient doit se brosser les dents avec de l'eau pure, en effectuant des rinçages répétés. Ne pas utiliser de dentifrice.
2. Collecter le crachat (expectoration) dans un flacon stérile, idéalement le premier de la matinée.
3. L'échantillon doit être de nature mucopurulente.

Identification Bactérienne : Coloration de Gram

Protocole de la Coloration de Gram

1. Préparation de la lame : Étaler les colonies étudiées sur une lame propre, mélangées à une solution saline stérile. Fixer la préparation en la déplaçant doucement au-dessus de la flamme du brûleur jusqu'à évaporation complète du liquide, en veillant à ne pas surchauffer la lame. Placer la lame dans le support de coloration.
2. Recouvrir la lame avec le cristal violet pendant une minute.
3. Ajouter la solution d'iode (lugol) pendant une minute.
4. Rincer à l'eau du robinet et décolorer avec de l'alcool-acétone.
5. Recouvrir la lame avec le colorant de contraste (fuchsine) et rincer.
6. Laisser sécher la lame inclinée.
7. Observer au microscope à l'objectif à immersion (100x).

Interprétation et Identification Post-Coloration

Lors de l'observation de la coloration de Gram, les bactéries doivent être analysées selon les critères suivants :

• La forme (cocci, bacilles, etc.)
• La couleur de la coloration (Gram positif ou négatif)
• La taille
• Le regroupement (chaînes, grappes, paires)

Une fois que les bactéries ont développé des cultures, il est nécessaire d'observer les caractéristiques des colonies pour définir le genre et l'espèce.

Tests d'Identification Clés (Staphylococcus et Streptococcus)

Test de la Catalase

La catalase est une enzyme qui décompose le peroxyde d'hydrogène en oxygène et en eau. Ce test est crucial car il permet de différencier les membres de la famille Micrococcaceae de ceux appartenant à la famille Streptococcaceae.

Interprétation des résultats

• L'émergence rapide de bulles de gaz (effervescence) indique une réaction positive.
• Le genre Micrococcus donne une réaction positive.
• Le genre Streptococcus donne une réaction négative.

Test de la Coagulase

La coagulase est une enzyme protéique capable de convertir le fibrinogène en fibrine, provoquant la formation d'un caillot visible dans un système d'analyse approprié.

Interprétation

• Une réaction positive est indiquée par la formation d'un caillot ou d'un gel.
• Les bactéries Staphylococcus aureus sont positives à ce test.

Test de Fermentation du Glucose

Ce test est utilisé pour différencier le genre Micrococcus du genre Staphylococcus, car ce dernier donne un résultat positif à ce test.

Test de Fermentation du Mannitol à 1%

Les souches de Staphylococcus aureus (S. aureus) possèdent la capacité de fermenter le mannitol avec production d'acide, contrairement à Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis).

Résultat

Le changement de couleur (virage au jaune) indique une réaction positive due à l'acidification du milieu.

Test de la DNase

Ce test est utile dans l'identification des souches de S. aureus, qui produit l'enzyme DNase capable d'hydrolyser l'ADN.

Résultat

Un changement de couleur du milieu autour de la colonie indique l'hydrolyse de l'ADN, signifiant une réaction positive.

Focus sur la Famille Streptococcaceae

Caractéristiques de la Famille Streptococcaceae

Ce sont des cocci à Gram positif regroupés en paires ou en chaînes. Sur un milieu de culture solide, les colonies sont généralement petites et translucides.

Classification des Streptocoques d'Importance Clinique

Les différents genres peuvent être classés en fonction de leurs propriétés immunologiques, hémolytiques et/ou biochimiques. Lors de la culture sur gélose au sang, il est essentiel de déterminer leurs caractéristiques hémolytiques.

Détermination des Propriétés Hémolytiques

Le type d'hémolyse produit sur gélose au sang est très utile pour l'identification des Streptococcus.

• Les milieux utilisés doivent être exempts de sucres.
• Attention : L'incubation dans une atmosphère enrichie en CO₂ peut inhiber la production d'hémolyse.

Types d'Hémolyse

• Hémolyse Alpha (α) : Hémolyse partielle par l'altération de l'hémoglobine en méthémoglobine.
• Hémolyse Bêta (β) : Hémolyse totale des globules rouges par l'action des hémolysines (Streptolysines S et O).
• Hémolyse Gamma (γ) : Absence d'hémolyse.

Identification par Propriétés Biochimiques

Les streptocoques sont classés sur la base de réactions biochimiques qui permettent de distinguer les espèces suivantes :

• Streptococcus pyogenes
• Streptococcus viridans
• Streptococcus pneumoniae